13651923355
技術(shù)文章
紫外分光光度計(jì)（UV-Vis Spectrophotometer）是一種用于測量物質(zhì)對紫外光（200–400 nm）和可見光（400–800 nm）吸收特性的分析儀器。它通過檢測樣品對特定波長光的吸收程度，進(jìn)行定性或定量分析，廣泛應(yīng)用于化學(xué)、生物、醫(yī)藥、環(huán)境等領(lǐng)域。以下是其主要用途和特點(diǎn)：
定量分析
DNA/RNA濃度檢測（260 nm處吸光度，A260）。
蛋白質(zhì)定量（Bradford法、BCA法或直接280 nm測量）。
藥物含量分析（如阿司匹林在230 nm處的吸收）。
測定溶液中特定物質(zhì)的濃度（如DNA/RNA、蛋白質(zhì)、藥物成分）。
依據(jù)朗伯-比爾定律（吸光度A = εlc，ε為摩爾吸光系數(shù)，l為光程，c為濃度），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算未知樣品濃度。
常見應(yīng)用：
定性分析
有機(jī)化合物鑒定（如苯環(huán)在250 nm附近有特征吸收）。
污染物檢測（如硝酸鹽在220 nm處吸收）。
通過掃描樣品的吸收光譜（如200–800 nm），判斷物質(zhì)結(jié)構(gòu)或純度。
示例：
動力學(xué)研究
監(jiān)測化學(xué)反應(yīng)過程中吸光度的實(shí)時(shí)變化，推算反應(yīng)速率或中間產(chǎn)物濃度。
純度檢測
通過吸收峰形和位置評估樣品純度（如蛋白質(zhì)A280/A260比值判斷核酸污染）。
光源：氘燈（紫外區(qū)）和鎢燈（可見光區(qū)）。
單色器：將復(fù)合光分離為單一波長光（光柵或棱鏡）。
樣品室：放置比色皿（石英用于紫外區(qū)，玻璃/塑料僅用于可見光區(qū)）。
檢測器：光電倍增管（PMT）或光電二極管陣列（PDA）。
樣品準(zhǔn)備
液體需澄清無懸浮物（渾濁樣品需離心或過濾）。
溶劑選擇：避免溶劑在測量波長下有強(qiáng)吸收（如苯在紫外區(qū)有吸收）。
比色皿使用
紫外區(qū)用石英比色皿（玻璃會吸收紫外光）。
手持比色皿時(shí)避免觸碰光面，需用擦鏡紙清潔。
基線校正
測量前用空白溶劑（如純水或緩沖液）調(diào)零，消除背景干擾。
波長選擇
選擇被測物質(zhì)的最大吸收波長（λmax）以提高靈敏度。
生命科學(xué)
DNA/RNA濃度和純度檢測（A260/A280比值）。
酶活性測定（如NADH在340 nm處吸光度變化）。
制藥行業(yè)
藥物含量測定、溶出度測試。
環(huán)境監(jiān)測
水質(zhì)分析（如硝酸鹽、重金屬離子）。
食品工業(yè)
添加劑檢測（如防腐劑苯甲酸在225 nm處吸收）。
優(yōu)點(diǎn)：操作簡便、成本低、分析速度快。
缺點(diǎn)：
僅適用于具有紫外或可見光吸收的物質(zhì)。
靈敏度低于熒光或質(zhì)譜法，可能受雜質(zhì)干擾。
部分儀器支持：
多波長掃描：獲取全波段吸收光譜。
時(shí)間驅(qū)動模式：追蹤反應(yīng)動力學(xué)過程。
反射附件：測量固體樣品（如薄膜、粉末）。
紫外分光光度計(jì)是實(shí)驗(yàn)室的基礎(chǔ)設(shè)備，其數(shù)據(jù)可靠性依賴于規(guī)范操作和定期校準(zhǔn)（如波長準(zhǔn)確性、光度線性檢查）。
掃碼加微信